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pHSense? Eu 探針
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pHSense? Eu 探針

pHSense? Eu探針是瑞孚迪推出的新一代鑭系銪穴狀化合物,專為內(nèi)化研究而開發(fā)。它具有獨特的二維pH敏感性,當(dāng)pH值為中性/堿性時,其620nm發(fā)射光信號非常低,而當(dāng)pH值下降至酸性時,620nm發(fā)射光信號強(qiáng)度顯著上升。除此之外,620nm發(fā)射光的壽命也會隨pH值變化而改變,趨勢表現(xiàn)為隨著pH值下降,620nm發(fā)射光壽命延長,因此可實現(xiàn)時間分辨熒光(TRF)檢測。

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pHSense? Eu探針是瑞孚迪推出的新一代鑭系銪穴狀化合物,專為內(nèi)化研究而開發(fā)。它具有獨特的二維pH敏感性,當(dāng)pH值為中性/堿性時,其620nm發(fā)射光信號非常低,而當(dāng)pH值下降至酸性時,620nm發(fā)射光信號強(qiáng)度顯著上升。除此之外,620nm發(fā)射光的壽命也會隨pH值變化而改變,趨勢表現(xiàn)為隨著pH值下降,620nm發(fā)射光壽命延長,因此可實現(xiàn)時間分辨熒光(TRF)檢測。


技術(shù)原理:PH驅(qū)動的“信號開關(guān)”

  • 胞外狀態(tài)(中性pH):pHSense? Eu探針位于細(xì)胞外,熒光信號極低(靜默)。

  •  內(nèi)化后(酸性內(nèi)體/溶酶體):探針隨ADC/GPCR進(jìn)入酸性環(huán)境,觸發(fā)強(qiáng)烈、長壽命的Eu熒光信號。

憑借獨特的二維pH靈敏度特性,pHSense? Eu探針可實現(xiàn)高靈敏、高檢測窗口的ADC/GPCR內(nèi)化檢測。


pHSense? Eu探針可通過不同形式標(biāo)記ADC/GPCR:


ADC內(nèi)化實驗:整個實驗流程僅需四步,且只需在細(xì)胞培養(yǎng)板操作即可。

以貼壁細(xì)胞為示例,步驟為:細(xì)胞過夜培養(yǎng)-棄培養(yǎng)基上清-加入經(jīng)pHSense? Eu Fab anti-Human lgG標(biāo)記的ADC-讀數(shù),全程無需洗滌,支持實時監(jiān)測。同時,基于酶標(biāo)儀讀取數(shù)值的檢測形式,大大提高了實驗的效率和通量,且支持96&384-wells通量。


GPCR內(nèi)化實驗:操作極簡,典型操作僅需4步。

以Anti-Flag為例(適用于帶有Flag標(biāo)簽的GPCR):

(1)細(xì)胞鋪板過夜→棄上清

(2)加入pHSense? Eu探針→孵育

(3)加入化合物(激動劑/拮抗劑)

(4)酶標(biāo)儀讀數(shù)(可實時監(jiān)測)


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